明日葉查爾酮對２型糖尿病大鼠血清ＥＴ－１和ＶＥ－ｃａ影響

研究地點：青島大學醫學院營養研究所，山東青島，２６６０２１

摘   要

目的

研究明日葉查爾酮（ＡＣ）對２型糖尿病大鼠血管內皮細胞損傷的保護作用。

方法

將用高脂飼料餵養加鏈脲佐菌素腹腔注射誘發的２型糖尿病動物模型，隨機分為糖尿病對照組和高、中、低劑量ＡＣ組，每組１０只。糖尿病對照組餵飼高脂飼料並經口灌胃蒸餾水，高、中、低劑量ＡＣ組分別經口灌胃３０、１０和５ｍｇ／ｋｇＡＣ，正常對照組給予普通飼料，連續４周後測定各組血清內皮素－１、鈣黏蛋白、丙二醛、空腹血糖和血清胰島素等水平的變化。

結果

與糖尿病對照組比較，高劑量ＡＣ組內皮素－１和鈣黏蛋白的含量降低，空腹血糖和血清胰島素水平降低，差異均有顯著性（Ｆ＝４．５８～４８．２９，ｑ＝３．４５～１４．９４，Ｐ＜０．０５）。

結論

ＡＣ可降低２型糖尿病大鼠血清內皮素－１和鈣黏蛋白的水平，對血管內皮細胞的損傷有保護作用。

關鍵詞：明日葉查爾酮；２型糖尿病；內皮縮血管肽類；橋粒鈣黏蛋白質類

 

明日葉是一種原產於日本八丈諸島野生芹科植物，明日葉查爾酮（ＡＣ）是明日葉的主要功效成分，具有提高機體免疫力、延緩衰老等多種功效，在抗腫瘤、抗氧化、抗糖尿病等方面具有良好作用。研究證明，ＡＣ具有胰島素樣抗糖尿病活性，誘導葡萄糖轉運體移位，起到降血糖的作用。但是目前尚未見有ＡＣ對２型糖尿病病人血管內皮細胞影響的研究報道。本實驗通過給予２型糖尿病大鼠不同劑量ＡＣ的方法，觀察ＡＣ對２型糖尿病大鼠血管內皮細胞損傷的保護作用。

 

１材料與方法

１．１材料

清潔級雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只，體質量１６０~１８０ｇ，由山東魯抗醫藥實驗中心提供。

１．２實驗樣品

ＡＣ由本實驗室制備，經紫外線分光光度法測定其純度＞９０％。查爾酮標準品購於美國ＳＩＧＭＡ公司。

１．３儀器與試劑

ＴＤＬ－５離心機購於上海安亭科學儀器廠；電子天平為山海天平儀器廠產品；ＲｏｓｙｓＡｎｔｈｏｓ２０１０型雙波長酶標儀為深圳雷杜生命科學股份有限公司產品；內皮素（ＥＴ）放射免疫分析試劑盒、碘［１２５Ｉ］胰島素放射免疫分析試劑盒購於北京北方生物技術研究所；大鼠血管內皮鈣黏蛋白（ＶＥ－ｃａ）和丙二醛（ＭＤＡ）試劑盒購於南京建成生物工程研究所。

１．４實驗方法

１．４．１模型制備

用高脂飼料（由北京華阜康生物科技股份有限公司提供）餵養並腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素的方法制備２型糖尿病大鼠模型。自給予高脂飼料餵養的第２周起腹腔注射劑量為１５ｍｇ／ｋｇ體質量的鏈脲佐菌素，每周１次，連用３周，以空腹血糖高於１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ者視為造模成功。正常對照組給予普通飼料餵養並腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩衝液。１．４．２動物分組及處理

將誘發的２型糖尿病動物模型隨機分成４組，每組１０只。糖尿病對照組餵飼高脂飼料並經口灌胃蒸餾水，高、中、低劑量ＡＣ組餵飼高脂飼料並分別經口灌胃給予３０、１０、５ｍｇ／ｋｇ的ＡＣ，正常對照組（１０只）給予普通飼料並經口灌胃相同劑量的蒸餾水，連用４周。在末次灌胃後禁食１２ｈ，稱體質量，尾尖採血測定空腹血糖。全部動物按５ｍＬ／ｋｇ經腹腔注射７０ｇ／Ｌ的水合氯醛麻醉後，打開腹腔，腹主動脈取血，分離血清備檢。１．５檢測指標

ＥＴ－１採用免疫放射分析法檢測［５］。ＶＥ－ｃａ採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ＥＬＩＳＡ）試劑盒檢測，按照試劑盒說明書進行操作。血糖採用葡萄糖氧化酶法測定。血清胰島素採用放射免疫法測定。ＭＤＡ採用硫代巴比妥酸比色法測定。

１．６統計分析

採用ＳＰＳＳ１７．０統計軟件對計量資料進行單因素方差分析，兩兩比較採用ｑ檢驗。

 

２結果

糖尿病對照組ＥＴ－１、ＶＥ－ｃａ、ＭＤＡ、血糖、胰島素含量高於正常對照組，差異均有顯著意義（Ｆ＝４．５８～４８．２９，ｑ＝４．３６～１４．９４，Ｐ＜０．０５）。高劑量ＡＣ組的ＥＴ－１、ＶＥ－ｃａ、ＭＤＡ、血糖、胰島素含量均低於糖尿病對照組、低劑量ＡＣ組、中劑量ＡＣ組，差異均有顯著性（ｑ＝３．０２～１２．１１，Ｐ＜０．０５）；而與正常對照組比較差異無顯著性（Ｐ＞０．０５）。結果見表１。

３討論

血管病變是２型糖尿病的主要併發症，血管內皮損傷是導致糖尿病血管病變機制之一。血管內皮細胞具有高度的代謝和分泌活性，能感知炎性信號和分泌活性物質。受損後的血管內皮細胞可發生功能障礙，導致分泌功能失調和分泌的多種活性物質之間失衡。內皮細胞功能障礙與心腦血管疾病，特別是動脈粥樣硬化的形成密切相關。

國內外很多研究結果表明，２型糖尿病病人存在血管內皮功能障礙，高濃度葡萄糖可誘導血管內皮細胞功能的異常。

ＡＣ屬黃酮類化合物，其化學結構為１，３－二苯基丙烯酮。研究證明，ＡＣ具有抗糖尿病、降血糖的作用。

本研究結果顯示，糖尿病對照組的空腹血糖和胰島素水平均顯著高於正常對照組，表明成功誘發了２型糖尿病大鼠模型。高劑量ＡＣ組的空腹血糖和胰島素均低於糖尿病對照組，提示ＡＣ能降低２型糖尿病大鼠的血糖和胰島素水平，改善其胰島素抵抗狀況。ＥＴ－１是血管內皮細胞分泌的具有強大縮血管和促進細胞分裂的肽類物質，可以增加血管通透性，促進血管平滑肌細胞增殖和遷移。在正常情況下，ＥＴ－１和一氧化氮這對拮抗因子保持細胞的舒縮平衡。當血管內皮細胞受到損傷，這種平衡就會被打破。糖尿病病人血清ＥＴ－１水平可明顯升高。

本研究結果顯示，糖尿病對照組大鼠血清ＥＴ－１水平高於正常對照組，提示其血管內皮細胞受到損傷。高劑量ＡＣ組血清ＥＴ－１水平低於糖尿病對照組，表明ＡＣ對大鼠血管內皮細胞的損傷具有保護作用。ＶＥ－ｃａ能保持細胞的完整性和極性。

國外研究顯示，ＶＥ－ｃａ水平是反映血管內皮細胞損害的有效指標。王佔華等研究顯示，晚期糖基化終產物可引起ＶＥ－ｃａ分布和形態改變。本研究結果顯示，糖尿病對照組血清ＶＥ－ｃａ濃度明顯高於正常對照組，而高劑量ＡＣ組則低於糖尿病對照組，說明２型糖尿病大鼠血管內皮已受到損害，ＡＣ對２型糖尿病大鼠血管內皮的損傷具有保護作用。

本實驗結果亦顯示，糖尿病對照組ＭＤＡ水平較正常對照組升高，而高劑量ＡＣ組則較糖尿病對照組降低，提示ＡＣ對抑制糖尿病大鼠脂質過氧化有一定作用，這也可能是ＡＣ對２型糖尿病大鼠血管內皮細胞損傷具有一定保護作用的機制所在。